離心機(jī)中離心使用方法
一、離心機(jī)中離心使用方法
1、淘洗離心法
淘洗離心主要用于整細(xì)胞的離心分離。淘洗離心仍然是在離心力的作用下使顆粒沉降分離的過程，是將均勻的淘洗液連續(xù)加入到淘洗轉(zhuǎn)子內(nèi)，在離心力的作用下，顆粒受到方向朝外的離心力和反方向的液流作用，當(dāng)兩種方向的作用力達(dá)到平衡時(shí)，每一種顆粒按照其沉降速度達(dá)到平衡的位置。具有相同性質(zhì)(如形狀、大小、密度等)的顆粒將聚集在淘洗室內(nèi)，形成一個(gè)穩(wěn)定的區(qū)帶。質(zhì)量比較小的顆粒隨流體流動(dòng)的方向流出，這樣可以將樣品中不需要的懸浮物淘洗出去，保留所需的顆粒。
2、連續(xù)流離心機(jī)離心方法
連續(xù)流離心是在離心力的作用下，連續(xù)向連續(xù)流轉(zhuǎn)子內(nèi)加入樣品溶液，顆粒在離心力的作用下發(fā)生沉淀，上清液受注入樣品溶液的壓力不斷溢出，最終獲得所需顆粒。此法適用于溶液稀、處理量大的樣品溶液離心這樣可以減少開機(jī)時(shí)間、提高效率。在發(fā)酵工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)中用于細(xì)胞和培養(yǎng)液的分離，也可以用于分離不同生長周期的細(xì)胞。連續(xù)流離心基本原理的一種表述。
3、地壤離心方法
地壤離心的使用一般是在專用離心轉(zhuǎn)子中進(jìn)行把裝入土壤樣品的樣品杯裝入轉(zhuǎn)子，在離心進(jìn)選擇一系列不同轉(zhuǎn)速下形成的離心力場(chǎng)強(qiáng)度，來模擬自然的條件，通過測(cè)排水理來研究、推測(cè)不同土壤的含水率和保水性等。
二、超速離心機(jī)的離心方法
用離心方法分離生物大分子和亞細(xì)胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們?cè)谝后w介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶，或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開。前者是沉降速度法，應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要小于樣品中最小顆粒的密度，離心時(shí)選用高轉(zhuǎn)速和短時(shí)間；后者是沉降平衡法，應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要大于樣品中最小顆粒的密度，離心時(shí)選用較低轉(zhuǎn)速和較長時(shí)間。實(shí)際操作有
幾種形式：
1.差速離心這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心，分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液，在高速離心上清沉降中等顆粒，最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級(jí)提高離心力分離上情液的方法，把不同大小的顆粒分開。這種方法比較簡(jiǎn)單，方便。分離的組份沉到管底，因此可以迅速濃縮所要的組份，減少體積。但回收率和純度是有矛盾的，要提高回收率，勢(shì)必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時(shí)間，這樣大小相近的顆粒也會(huì)沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
2.速度區(qū)帶(或速度梯度)離心本法是將樣品放在一個(gè)連續(xù)的密度梯度液體上，通過離心，大顆粒沉降快，小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時(shí)間，相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子，因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì)，如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多，但分子量不一樣，用本法很容易將其分開。但對(duì)密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度，用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個(gè)組份。
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