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電泳儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
[ 2013/7/1 14:49:04 ] [轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明來(lái)源:就是要儀器網(wǎng)]

                                                                電泳儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 
1.材料與試劑
  1.1  pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液
  1.2  0.5%氨基黑染色液
  1.3  透明液:
              冰醋酸           3 份
              95%乙醇         2 份
              混合即可
  1.4  醋酸纖維膜
    
2.操作方法
   2.1 將醋酸纖維膜條浸于巴比妥緩沖液中,浸透后用竹鑷子夾到濾紙上,吸去過(guò)多的水分。將膜的光滑面向下搭在電泳槽兩側(cè)的濾紙橋上,注意搭平。
   2.2 加樣 用微量加樣器于負(fù)極端1.5cm處加樣1μl~3μl,注意樣品要成一條直線且垂直方向。也可用血球計(jì)數(shù)板蓋玻片蘸取樣品輕輕點(diǎn)上。
   2.3  電泳 電壓10V/cm~15V/cm或0.4mA/cm~0.6mA/cm電泳45min~60min,至電泳區(qū)帶展開約2.5cm~3.5cm時(shí),關(guān)閉電源。
   2.4 染色 將膜浸于氨基黑染色液中,染色數(shù)分鐘。
   2.5 透明 將染色的醋酸纖維膜浸于透明液中,漂洗5min ~10min,至背景呈乳白色為止。為了防止膜上出現(xiàn)許多氣泡,可以逐漸升高透明液濃度10%、20%以至30%。
   2.6 結(jié)果觀察及保存 透明后,將膜貼于玻璃上,干后取下,即可觀察結(jié)果并保存。
   2.7 定量 將各區(qū)帶剪下,分別浸于4Mol/L NaOH 4ml中,振搖數(shù)次,約2h,色澤被浸出,于580nm~620nm比色,測(cè)出各區(qū)帶的OD值。同時(shí)剪一塊大小相似無(wú)蛋白的透明膜同樣處理,做為對(duì)照。  
       計(jì)算各區(qū)帶蛋白含量百分比(以血清為例)
       總OD值T=A+α1+α2+β+γ  白蛋白%=A/T×100%  以此類推。 

3. 儀器的基本技術(shù)性能 
   3.1 電泳區(qū)帶分離清楚,比瓊脂平板電泳分辨率高;
   3.2 可以定量;
   3.3 樣品用量少,只需要幾微升即可。

4. 注意事項(xiàng)
   4.1 醋酸纖維膜孔隙小,含水量少,且較薄,因此它對(duì)熱很敏感,故應(yīng)注意控制電壓、電流。
   4.2 樣品不可過(guò)多,只需幾微升即可。
   4.3 加樣一定要呈直線、垂直、分布均勻,這樣泳動(dòng)的區(qū)帶整齊、不歪。
   4.4 注意醋酸纖維膜的質(zhì)量,浸泡很久仍有大塊白色硬點(diǎn)者可棄之不用

 

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